目的基因克隆实验失败的原因可能有哪些

1. 培养基中的抑制因素对目标基因的克隆有不利影响。 2. 插入片段可能没有被正确地克隆进去。 3. 运用载体DNA可能存在非特异性酶切位点，影响了目标基因的定向克隆。 4. 由于DNA外切酶连接时没有适当的保留5’端3’端，导致无法正确地与载体衔接。 5. 插入片段及载体DNA中存在多态性或者重复序列，使得相互间无法正常衔接。